Максимальная скорость лады гранты


Максимальная скорость Лада Гранта: стандарт, норма, спорт, люкс

Автомобиль: Лада Гранта.
Спрашивает: Морозов Михаил.
Суть вопроса: Какая максимальная скорость у Лада Гранта?


Доброго времени суток Вам! У меня Лада Гранта в максимальной комплектации, скажите, какая же у неё максимальная скорость?


Содержание

  • 1 Тип двигателя и максимальная скорость
    • 1.1 Подробно о модификациях седана
    • 1.2 Подробно о модификациях лифтбека
    • 1.3 Лада Гранта СПОРТ (Люкс и Light)
  • 2 Выводы

Тип двигателя и максимальная скорость

Автомобиль Лада Гранта или ВАЗ – 2190, начал свою историю с 2011 года. За пять лет выпуска, на дороги было выпущено порядка полумиллиона экземпляров в различных модификациях и типах кузова.

The following two tabs change content below.

  • Об эксперте:

Владею автомобилем Рено Меган 2, до этого были Ситроены и Пежо. Работаю в сервисной зоне дилерского центра, поэтому знаю устройство автомобиля "от и до". Вы можете всегда обратиться ко мне за советом.

Соответственно в зависимости от комплектации, автомобили оснащались и разными типами двигателей, которые в свою очередь напрямую влияют на максимальную скорость транспортного средства.

Подробно о модификациях седана

Вид спереди сбоку

Самая первая версия народного российского автомобиля сразу полюбилась всем любителям нашего автопрома. После многочисленных испытаний и проверок, автомобиль прошел все проверки и с линии сошли автомобили следующих модификаций:

Подробно о модификациях лифтбека

Одна из последних идей дизайнеров АвтоВАЗа, которая была представлена общественности в марте 2013 года. Не смотря на то, что претерпели изменения форма кузова и бампера, саму начинку создатели оставили без изменений.

  • 1.6 литра 8V 5 МКПП – 87 л.с с максимальной скоростью 167 км\час
  • 1. 6 литра 16V 4 АКПП – 98 л.с с максимальной скоростью 166 км\час
  • 1.6 литра 16V 5 МКПП – 106 л.с с максимальной скоростью 177 км\час
  • 1.6 литра 16V 5 АМКПП – 106 л.с с максимальной скоростью 179 км\час

Лада Гранта СПОРТ (Люкс и Light)

Под капотом Лада Гранта Спорт

Из всей линейки, эта модель безусловно выделяется своей спортивной манерой, низкой посадкой, изящными линиями кузова и высокопроизводительным двигателем. Модель под лейблом СПОРТ выпускается в двух комплектациях Light и Luxe, оснащенная механической коробкой с двигателем объёмом 1.6 литра 16V и способной развить максимальную скорость в 197 километров в час.

Выводы

Как вы могли убедиться, создатели народного автомобиля приложили максимум усилий для того, чтобы автолюбители смогли воочию подобрать для себя тот автомобиль, который соответствовал каждому для их потребностей.

Технические характеристики Lada Granta (Лада Гранта)

Новая Лада Гранта построена на базе модели Калина, вначале автомобиль будет выпускаться в кузове седан, а с 2013 года появится и хэтчбек.

Автомобиль предлагается в трех комплектациях: «Стандарт», «Норма» и «Люкс». Версия в комплектации «Стандарт» получила 1,6-литровый мотор от Калины, две другие предлагаются с новым 8-клапанным силовым агрегатом объемом 1,6 литра мощностью 80 и 90 л.с., соответственно. Коробка передач — механическая 5-ступенчатая, привод на передние колеса.

Все варианты двигателей работают на бензине АИ-95, их средний расход от 8,7 до 9,3 литров на сотню в городе, от 5,8 до 6,1 литра — за городом и от 7,2 до 7,3 литров — в смешанном цикле.

Максимальная скорость самой мощной модификации Лады Гранта, по данным производителя, составляет 168,5 км/ч. Разгон с места до сотни у нее же занимает 12,0 секунд.

Более подробные технические характеристики Лада Гранта смотрите в приведенной ниже таблице. Стоимость Лада Гранта можно узнать в соответствующем разделе сайта.

Таблица технических характеристик Лада Гранта (ВАЗ-2190)
Автомобиль Лада Гранта (ВАЗ-2190)
Модификация "Стандарт" "Норма" "Люкс"
Тип кузова Четырехдверный седан
Число мест 5
Длина, мм 4260
Ширина, мм 1700
Высота, мм 1500
База, мм 2470
Колея передняя, мм 1430
Колея задняя, мм 1410
Педений свес, мм 810
Задний свес, мм 980
Мин. дорожный просвет, мм 160
Объем багажника, л 500
Масса снаряженная, кг 1040 1080 1100
Распределение снаряженной массы по передней/задней осям, % 59/41 59/41 59/41
Полезная нагрузка, кг 475
Полная масса, кг 1515 1555 1575
Распределение полной массы по передней/задней осям, % 50/50 50/50 50/50
Масса прицепа с тормозами/без тормозов, кг 900/450
Коэффициент аэродинамического сопротивления 0,367 0,353
Двигатель Бензиновый, с распределенным прыском
Обозначение двигателя ВАЗ-11183 ВАЗ-21116
Расположение спереди, поперечно
Число и расположение цилиндровов 4, в ряд
Рабочий объем, см3 1597
Диаметр цилиндра/ход поршня, мм 82,0/75,6
Степень сжатия 9,8:1 10,5:1
Число клапанов 8
Максимальная мощность, л. с./кВт/об/мин 80/59/5600 90/66/5600
Максимальный крутящий момент, Нм/об/мин 132/3500 143/3500
Коробка передач механическая, 5-ступенчатая
Привод передний
Передняя подвеска независимая, пружинная, McPherson
Задняя подвеска полузависимая, пружинная
Передние тормоза дисковые, вентилируемые
Задние тормоза барабанные
Шины 175/70 R13 175/65 R14
Максимальная скорость, км/ч 164,5 167,0 168,5
Время разгона от 0 до 100 км/ч, с 12,5 11,8 12,0
Расход топлива, л/100км  
— в городском режиме 9,3 8,5 8,7
— в загородном режиме 6,1 5,7 5,8
— в смешанном режиме 7,3 7,2 7,3
Выбросы CO2, г/км (смешанный цикл) 177 164 164
Емкость топливного бака, л 50
Топливо Бензин АИ-95

Скачать руководство по эксплуатации Лада Гранта

Tweet

 

Руководство по парам FRET флуоресцентных белков

1. Forster T. Energiewanderung und fluoreszenz. Натурвиссеншафтен. 1946; 33: 166–175. doi: 10.1007/BF00585226. [CrossRef] [Google Scholar]

2. Lam A.J., St-Pierre F., Gong Y., Marshall J.D., Cranfill P.J., Baird M.A., McKeown M.R., Wiedenmann J., Davidson M.W., Schnitzer M.J., et al. Улучшение динамического диапазона FRET с помощью ярко-зеленых и красных флуоресцентных белков. Нац. Методы. 2012;9:1005–1012. doi: 10.1038/nmeth.2171. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

3. Miyawaki A. Разработка зондов для клеточных функций с использованием флуоресцентных белков и резонансного переноса энергии флуоресценции. Анну. Преподобный Биохим. 2011; 80: 357–373. doi: 10.1146/annurev-biochem-072909-094736. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Piston D.W., Kremers G.J. Флуоресцентный белок FRET: хороший, плохой и уродливый. Тенденции биохим. науч. 2007; 32: 407–414. doi: 10.1016/j.tibs.2007.08.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Машарина А. , Реймонд Л., Морел Д., Умезава К., Джонссон К. Флуоресцентный сенсор для габа и синтетических лигандов габа(b) рецепторов. Варенье. хим. соц. 2012;134:19026–19034. doi: 10.1021/ja306320s. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

6. Lesmana J., Friedl P. Дестабилизация зеленого флуоресцентного белка путем замены его амино-концевого остатка. Аним. Сотовая технология. Метка цели. 2001; 1: 6–9. [Google Scholar]

7. Аоки К., Комацу Н., Хирата Э., Камиока Ю., Мацуда М. Стабильная экспрессия биосенсоров FRET: новый взгляд на исследования рака. Онкологические науки. 2012; 103: 614–619. doi: 10.1111/j.1349-7006.2011.02196.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

8. Zaccolo M. Использование химерных флуоресцентных белков и резонансного переноса энергии флуоресценции для мониторинга клеточных ответов. Цирк. Рез. 2004; 94: 866–873. doi: 10.1161/01.RES.0000123825.83803.CD. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

9. Vogel S.S., Nguyen T.A., van der Meer B. W., Blank P.S. Влияние гетерогенности и темных акцепторных состояний на FRET: последствия использования доноров и акцепторов флуоресцентных белков. ПЛОС ОДИН. 2012;7:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0049593. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

10. Скотт Б.Л., Хоппе А.Д. Оптимизация трио флуоресцентных белков для трехсторонней FRET-визуализации белковых взаимодействий в живых клетках. науч. Отчет 2015; 5:10270. doi: 10.1038/srep10270. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

11. Hoepker A.C., Wang A., Le Marois A., Suhling K., Yan Y., Marriott G. Генетически кодируемые сенсоры белковой гидродинамики и молекулярных близость. проц. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2015;112:E2569–E2574. doi: 10.1073/pnas.1424021112. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

12. Padilla-Parra S., Tramier M. FRET-микроскопия в живой клетке: разные подходы, сильные и слабые стороны. Биоэссе. 2012; 34: 369–376. doi: 10. 1002/bies.201100086. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

13. Польша С.П., Крстаич Н., Монипенни Дж., Коэльо С., Тиндалл Д., Уокер Р.Дж., Девож В., Ричардсон Дж., Даттон Н., Барбер П. ., и другие. Высокоскоростной мультифокальный многофотонный флуоресцентный микроскоп для визуализации FRET живых клеток. Биомед. Опц. Выражать. 2015; 6: 277–296. doi: 10.1364/BOE.6.000277. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

14. Zimmermann T., Rietdorf J., Girod A., Georget V., Pepperkok R. Спектральная визуализация и линейное разделение позволяют повысить эффективность FRET с новая пара gfp2-yfp FRET. ФЭБС лат. 2002; 531: 245–249. doi: 10.1016/S0014-5793(02)03508-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

15. Thaler C., Koushik S.V., Blank P.S., Vogel S.S. Количественная многофотонная спектральная визуализация и ее использование для измерения резонансной передачи энергии. Биофиз. Дж. 2005; 89: 2736–2749. doi: 10.1529/biophysj.105.061853. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

16. Зеуг А., Велер А., Неер Э., Понимаскин Е.Г. Количественные подходы FRET на основе интенсивности — сравнительный снимок. Биофиз. Дж. 2012; 103:1821–1827. doi: 10.1016/j.bpj.2012.09.031. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

17. Broussard J.A., Rappaz B., Webb D.J., Brown C.M. Флуоресцентная резонансная микроскопия переноса энергии, продемонстрированная измерением активации серин/треонинкиназы akt. Нац. протокол 2013; 8: 265–281. doi: 10.1038/nprot.2012.147. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

18. Вех Р.Б., Бравая К.Б., Блох Д.А., Боммариус А.С., Толберт Л.М., Верховский М., Крылов А.И., Солнцев К.М. Фотовосстановление хромофора в красных флуоресцентных белках ответственно за обесцвечивание и фототоксичность. Дж. Физ. хим. Б. 2014; 118:4527–4534. doi: 10.1021/jp500919a. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

19. Кирбер М.Т., Чен К., Кини Дж. Ф. Новый взгляд на фотоконверсию Yfp: подтверждение cfp-подобных видов. Нац. Методы. 2007; 4: 767–768. doi: 10.1038/nmeth2007-767. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

20. Зал Т., Гаскойн Н.Р. Визуализация эффективности FRET живых клеток с коррекцией фотообесцвечивания. Биофиз. Дж. 2004; 86: 3923–3939. doi: 10.1529/biophysj.103.022087. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

21. Беккер В. Флуоресцентная визуализация жизни – методы и приложения. Дж. Микроск. 2012; 247:119–136. doi: 10.1111/j.1365-2818.2012.03618.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

22. Pietraszewska-Bogiel A., Gadella T.W. FRET-микроскопия: от принципа к рутинной технологии в клеточной биологии. Дж. Микроск. 2011; 241:111–118. doi: 10.1111/j.1365-2818.2010.03437.x. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

23. Дэй Р. Н., Дэвидсон М. В. Флуоресцентные белки для FRET-микроскопии: мониторинг белковых взаимодействий в живых клетках. Биоэссе. 2012; 34: 341–350. doi: 10.1002/bies.201100098. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

24. McGinty J., Stuckey D.W., Soloviev V.Y., Laine R., Wylezinska-Arridge M., Wells D.J., Arridge S.R., French P.M., Hajnal J.V. , Сардини А. Флуоресцентная флуоресцентная томография in vivo зонда FRET, экспрессируемого у мыши. Биомед. Опц. Выражать. 2011;2:1907–1917. doi: 10.1364/BOE.2.001907. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

25. Hoppe A., Christensen K., Swanson J.A. Стехиометрия на основе переноса энергии флуоресцентного резонанса в живых клетках. Биофиз. Дж. 2002; 83: 3652–3664. doi: 10.1016/S0006-3495(02)75365-4. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

26. Эриксон М.Г., Алсейхан Б.А., Петерсон Б.З., Юэ Д.Т. Преассоциация кальмодулина с потенциалзависимыми кальциевыми (2+) каналами, выявленная методом FRET в одиночных живых клетках . Нейрон. 2001;31:973–985. doi: 10.1016/S0896-6273(01)00438-X. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

27. Zal T., Gascoigne N.R. Использование визуализации FRET в реальном времени для выявления ранних межбелковых взаимодействий во время активации Т-клеток. Курс. мнение Иммунол. 2004; 16: 674–683. [PubMed] [Google Scholar]

28. Левитт Дж. А., Мэтьюз Д. Р., Амир-Бег С. М., Сухлинг К. Время жизни флуоресценции и визуализация с поляризационным разрешением в клеточной биологии. Курс. мнение Биотехнолог. 2009; 20:28–36. doi: 10.1016/j.copbio.2009.01.004. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

29. Мэтьюз Д.Р., Карлин Л.М., Офо Э., Барбер П.Р., Войнович Б., Ирвинг М., Нг Т., Амир-Бег С.М. Покадровая FRET-микроскопия с использованием анизотропии флуоресценции. Дж. Микроск. 2010; 237:51–62. doi: 10.1111/j.1365-2818.2009.03301.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

30. Rizzo M.A., Piston D.W. Высококонтрастное изображение флуоресцентного белка FRET с помощью флуоресцентной поляризационной микроскопии. Биофиз. Дж. 2005; 88: L14–L16. doi: 10.1529/biophysj.104.055442. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

31. Маттейзес А.Л., Хоппе А.Д., Аксельрод Д. Поляризованная флуоресцентная резонансная микроскопия с переносом энергии. Биофиз. Дж. 2004; 87: 2787–2797. doi: 10.1529/biophysj.103.036194. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

32. Кремерс Г.Дж., Годхарт Дж., ван Мюнстер Э.Б., Гаделла Т.В., мл. Голубые и желтые суперфлуоресцентные белки с улучшенной яркостью, сворачиванием белков и FRET радиус Форстера. Биохимия. 2006; 45: 6570–6580. doi: 10.1021/bi0516273. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

33. Хейм Р., Цзянь Р.Ю. Разработка зеленого флуоресцентного белка для улучшения яркости, увеличения длины волны и резонансной передачи энергии флуоресценции. Курс. биол. 1996; 6: 178–182. doi: 10.1016/S0960-9822(02)00450-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

34. Goedhart J., von Stetten D., Noirclerc-Savoye M., Lelimousin M., Joosen L., Hink M.A., van Weeren L., Gadella T.W., Jr. , Ройант А. Структурно-управляемая эволюция голубых флуоресцентных белков с квантовым выходом 93% Nat. коммун. 2012;3:751. doi: 10.1038/ncomms1738. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

35. Erard M., Fredj A., Pasquier H., Beltolngar D.B., Bousmah Y., Derrien V., Vincent P., Merola F. Минимальный набор мутаций, необходимый для оптимизации голубых флуоресцентных белков для визуализации живых клеток. Мол. Биосист. 2013; 9: 258–267. doi: 10.1039/C2MB25303H. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

36. Ai H.W., Henderson J.N., Remington S.J., Campbell R.E. Направленная эволюция мономерной, яркой и фотостабильной версии голубого флуоресцентного белка клавулярии: структурная характеристика и применение во флуоресцентной визуализации. Биохим. Дж. 2006; 400: 531–540. doi: 10.1042/BJ20060874. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

37. Марквардт М.Л., Кремерс Г.Дж., Крафт К.А., Рэй К., Крэнфилл П.Дж., Уилсон К.А., Дэй Р.Н., Вахтер Р.М., Дэвидсон М.В., Риццо М.А. Улучшенный лазурный флуоресцентный белок с повышенной яркостью и сниженным обратимым фотопереключением. ПЛОС ОДИН. 2011;6:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0017896. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

38. Koushik S.V., Chen H., Thaler C., Puhl HL, Vogel S.S. Cerulean, venus и venusy67c эталонные стандарты FRET. Биофиз. Дж. 2006;91:L99–L101. doi: 10.1529/biophysj.106.096206. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

39. Griesbeck O., Baird G.S., Campbell R.E., Zacharias D.A., Tsien R.Y. Снижение экологической чувствительности желтого флуоресцентного белка. Механизм и приложения. Дж. Биол. хим. 2001; 276: 29188–29194. doi: 10.1074/jbc.M102815200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

40. Shaner N.C., Steinbach P.A., Tsien R.Y. Руководство по выбору флуоресцентных белков. Нац. Методы. 2005;2:905–909. doi: 10.1038/nmeth819. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

41. Helmchen F., Denk W. Двухфотонная микроскопия глубоких тканей. Нац. Методы. 2005; 2: 932–940. doi: 10.1038/nmeth818. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

42. Цуцуи Х., Карасава С., Окамура Ю., Мияваки А. Улучшение измерений мембранного напряжения с использованием FRET с новыми флуоресцентными белками. Нац. Методы. 2008; 5: 683–685. doi: 10.1038/nmeth.1235. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

43. Джордж Абрахам Б., Саркисян К.С., Мишин А.С., Сантала В., Ткаченко Н.В., Карп М. Пары FRET на основе флуоресцентных белков с улучшенным динамическим диапазоном для измерения времени жизни флуоресценции. ПЛОС ОДИН. 2015;10:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0134436. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

44. Саркисян К.С., Горященко А.С., Лидский П.В., Горбачев Д.А., Божанова Н.Г., Гороховацкий А.Ю., Переверзева А.Р., Рюмина А.П., Жердева В.В., Савицкий А.П., и др. Зеленый флуоресцентный белок с анионным хромофором на основе триптофана и длительным временем жизни флуоресценции. Биофиз. Дж. 2015; 109: 380–389. doi: 10.1016/j.bpj.2015.06.018. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

45. Баджар Б.Т., Ван Э.С., Лам А.Дж., Ким Б.Б., Джейкобс С.Л., Хоу Э.С., Дэвидсон М.В., Лин М.З., Чу Дж. Повышение яркости и фотостабильности зеленых и красных флуоресцентных белков для визуализации живых клеток и отчетов FRET. науч. 2016;6:20889. doi: 10.1038/srep20889. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

46. Shaner N.C., Lambert G.G., Chammas A., Ni Y., Cranfill P.J., Baird M.A., Sell B.R., Allen J.R., Day R.N., Israelsson M. ., и другие. Яркий мономерный зеленый флуоресцентный белок, полученный из Branchiostoma lanceolatum. Нац. Методы. 2013;10:407–409. doi: 10.1038/nmeth.2413. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

, Baird M.A., et al. Неинвазивная прижизненная визуализация клеточной дифференцировки с помощью ярко-красного возбудимого флуоресцентного белка. Нац. Методы. 2014; 11: 572–578. doi: 10.1038/nmeth.2888. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

48. Филонов Г.С., Петкевич К.Д., Тинг Л.М., Чжан Дж., Ким К., Верхуша В.В. Яркий и стабильный флуоресцентный белок ближнего инфракрасного диапазона для визуализации in vivo. Нац. Биотехнолог. 2011; 29: 757–761. doi: 10.1038/nbt.1918. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

49. Shu X., Royant A., Lin M.Z., Aguilera T.A., Lev-Ram V., Steinbach P.A., Tsien R.Y. Экспрессия млекопитающими инфракрасных флуоресцентных белков, созданных из бактериального фитохрома. Наука. 2009; 324: 804–807. doi: 10.1126/science.1168683. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

50. Ван Л., Джексон В.К., Штайнбах П.А., Цзянь Р.Ю. Эволюция новых белков, не являющихся антителами, посредством итеративной соматической гипермутации. проц. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2004; 101:16745–16749. doi: 10.1073/pnas.0407752101. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

51. Lin LT, Wang B.S., Chen J.C., Liu CH, Chou C., Chiu SJ, Chang WY, Liu R.S., Allen Chang C., Lee Флуоресцентный слитый белок YJ Mplum-ifp 1.4 может проявлять свойства, связанные с переносом энергии резонанса Форстера, которые можно использовать для визуализации репортерного гена на основе ближней инфракрасной области. Дж. Биомед. Опц. 2013;18:126013. doi: 10. 1117/1.JBO.18.12.126013. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

52. Лекок Дж., Шнитцер М. Дж. Инфракрасный флуоресцентный белок для более глубокой визуализации. Нац. Биотехнолог. 2011;29:715–716. doi: 10.1038/nbt.1941. [Статья PMC free] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

53. Злобовская О.А., Саркисян К.С., Лукьянов К.А. Инфракрасный флуоресцентный белок irfp как акцептор для переноса энергии резонанса Форстера. биоорг. Химия. 2015;41:299–304. [PubMed] [Google Scholar]

54. Goedhart J., van Weeren L., Hink M.A., Vischer N.O., Jalink K., Gadella TW, Jr. Варианты ярко-голубого флуоресцентного белка, идентифицированные с помощью скрининга времени жизни флуоресценции. Нац. Методы. 2010; 7: 137–139.. doi: 10.1038/nmeth.1415. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

55. Рекас А., Алаттиа Дж. Р., Нагаи Т., Мияваки А., Икура М. Кристаллическая структура венеры, желтого флуоресцентного белка с улучшенным созреванием и пониженной чувствительностью к окружающей среде. Дж. Биол. хим. 2002; 277:50573–50578. doi: 10.1074/jbc.M209524200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

56. Нагаи Т., Ибата К., Парк Э.С., Кубота М., Микошиба К., Мияваки А. Вариант желтого флуоресцентного белка с быстрым и эффективным созреванием для клеток. биологические приложения. Нац. Биотехнолог. 2002; 20: 87–9.0. doi: 10.1038/nbt0102-87. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

57. Саркар П., Кошик С.В., Фогель С.С., Грычинский И., Грычинский З. Фотофизические свойства церулеевых и венерианских флуоресцентных белков. Дж. Биомед. Опц. 2009;14:034047. doi: 10.1117/1.3156842. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

58. Heikal A.A., Hess S.T., Baird G.S., Tsien R.Y., Webb W.W. Молекулярная спектроскопия и динамика внутренне флуоресцентных белков: кораллово-красный (dsred) и желтый (цитрин) Proc. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2000;97:11996–12001. doi: 10.1073/pnas.97.22.11996. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

59. Seefeldt B., Kasper R., Seidel T., Tinnefeld P., Dietz K.J., Heilemann M., Sauer M. Флуоресцентные белки для одиночных применение молекулярной флуоресценции. Дж. Биофотоника. 2008; 1:74–82. doi: 10.1002/jbio.200710024. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

60. Щербо Д., Шемякина И.И., Рябова А.В., Лукер К.Е., Шмидт Б.Т., Соуслова Е.А., Городничева Т.В., Струкова Л., Шидловский К.М., Британова О.В., и др. Ближние инфракрасные флуоресцентные белки. Нац. Методы. 2010; 7: 827–829.. doi: 10.1038/nmeth.1501. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

61. Ai H.W., Hazelwood K.L., Davidson M.W., Campbell R.E. Пары флуоресцентных белков FRET для логометрической визуализации двойных биосенсоров. Нац. Методы. 2008; 5: 401–403. doi: 10.1038/nmeth.1207. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

62. Щербакова Д.М., Хинк М.А., Йосен Л., Гаделла Т.В., Верхуша В.В. Оранжевый флуоресцентный белок с большим стоксовым сдвигом для многоцветных ГЦК с однократным возбуждением и визуализации FRET. Варенье. хим. соц. 2012;134:7913–7923. дои: 10.1021/ja3018972. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

63. Shaner N.C., Lin M.Z., McKeown M.R., Steinbach P.A., Hazelwood K.L., Davidson M.W., Tsien R.Y. Повышение фотостабильности ярких мономерных оранжевых и красных флуоресцентных белков. Нац. Методы. 2008; 5: 545–551. doi: 10.1038/nmeth.1209. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

64. Муракоши Х., Шибата А.С., Накахата Ю., Набекура Дж. Темно-зеленый флуоресцентный белок как акцептор для измерения переноса энергии резонанса Форстера. науч. Отчет 2015; 5:15334. doi: 10.1038/srep15334. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

65. Ганесан С., Амир-Бег С.М., Нг Т.Т., Войнович Б., Воутерс Ф.С. Темно-желтый флуоресцентный белок (yfp) на основе резонансного энергоакцепторного хромопротеина (достижение) для переноса энергии резонанса Форстера с gfp. проц. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2006; 103:4089–4094. doi: 10.1073/pnas.0509922103. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

66. Субач Ф.В., Чжан Л., Гаделла Т.В., Гурская Н.Г., Лукьянов К.А., Верхуша В.В. Красный флуоресцентный белок с обратимо фотопереключаемой абсорбцией для фотохромного FRET. хим. биол. 2010; 17:745–755. doi: 10.1016/j.chembiol.2010.05.022. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

67. Паттерсон Г.Х., Липпинкотт-Шварц Дж. Фотоактивируемый gfp для селективного фотомечения белков и клеток. Наука. 2002; 297:1873–1877. doi: 10.1126/science.1074952. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

68. Дон Пол К., Кисс К., Траоре Д.А., Гонг Л., Уилс М.С., Девениш Р.Дж., Брэдбери А., Прескотт М. Фанта: нефлуоресцентное фотохромное акцептор для pcFRET. ПЛОС ОДИН. 2013;8:1488. doi: 10.1371/annotation/b83e925b-2f2a-47b9-b939-0a1eeab18324. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

69. Zapata-Hommer O., Griesbeck O. Эффективно складывающиеся и циклически перестановочные варианты сапфирового мутанта gfp. БМС Биотехнология. 2003; 3: 1–6. doi: 10.1186/1472-6750-3-5. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

70. Субач О.М., Гундоров И.С., Йошимура М., Субач Ф.В., Чжан Дж., Грюнвальд Д., Суслова Е.А., Чудаков Д.М., Верхуша В.В. Превращение красного флуоресцентного белка в ярко-синий зонд. хим. биол. 2008; 15:1116–1124. doi: 10.1016/j.chembiol.2008.08.006. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

71. Чу Дж., О Ю., Сенс А., Атай Н., Дана Х., Маклин Дж. Дж., Лавив Т., Вельф Э. С., Дин К. М., Чжан Ф. и др. Яркий циан-возбудимый оранжевый флуоресцентный белок облегчает двухэмиссионную микроскопию и улучшает визуализацию биолюминесценции in vivo. Нац. Биотехнолог. 2016; 34: 760–767. doi: 10.1038/nbt.3550. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

72. Мерзляк Э.М., Годхарт Ю., Щербо Д., Булина М.Е., Щеглов А.С., Фрадков А.Ф., Гайнцева А., Лукьянов К.А., Лукьянов С., Гаделла Т.В. и др. Яркий мономерный красный флуоресцентный белок с увеличенным временем жизни флуоресценции. Нац. Методы. 2007; 4: 555–557. doi: 10.1038/nmeth2062. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

73. Бэрд Г.С., Захариас Д.А., Цзянь Р.Ю. Биохимия, мутагенез и олигомеризация dsred, красного флуоресцентного белка кораллов. проц. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2000;97:11984–11989. doi: 10.1073/pnas.97.22.11984. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

74. Campbell R.E., Tour O., Palmer A.E., Steinbach P.A., Baird G.S., Zacharias D.A., Tsien R.Y. Мономерный красный флуоресцентный белок. проц. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2002; 99: 7877–7882. doi: 10.1073/pnas.082243699. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

75. Patterson G.H., Piston D.W., Barisas B.G. Расстояния Форстера между парами зеленых флуоресцентных белков. Анальный. Биохим. 2000; 284:438–440. doi: 10.1006/abio.2000.4708. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

76. Щербо Д., Мерфи К.С., Ермакова Г.В., Соловьева Е.А., Чепурных Т.В. , Щеглов А.С., Верхуша В.В., Плетнев В.З., Хейзелвуд К.Л., Рош П.М., и др. Дальнекрасные флуоресцентные метки для визуализации белков в живых тканях. Биохим. Дж. 2009 г.;418:567–574. doi: 10.1042/BJ20081949. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

77. Муракоши Х., Ли С.Дж., Ясуда Р. Высокочувствительное и количественное изображение FRET-FLIM в одиночных дендритных шипах с использованием улучшенного безызлучательного yfp. Мозг. Клеточная биол. 2008; 36:31–42. doi: 10.1007/s11068-008-9024-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

78. Адам В., Берардоцци Р., Бырдин М., Буржуа Д. Фототрансформируемые флуоресцентные белки: задачи будущего. Курс. мнение хим. биол. 2014;20:92–102. doi: 10.1016/j.cbpa.2014.05.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

79. Демарко И.А., Периасами А., Букер С.Ф., Дэй Р.Н. Мониторинг динамических белковых взаимодействий с фототушением FRET. Нац. Методы. 2006; 3: 519–524. doi: 10.1038/nmeth889. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

80. Андо Р., Мизуно Х., Мияваки А. Регулируемый быстрый ядерно-цитоплазматический шаттл, наблюдаемый с помощью обратимого выделения белков. Наука. 2004; 306:1370–1373. doi: 10.1126/science.1102506. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

81. Каваи Х., Судзуки Т., Кобаяши Т., Сакураи Х., Охата Х., Хонда К., Момосе К., Намеката И., Танака Х., Сигенобу К. и др. Одновременное обнаружение в реальном времени активации инициатора и эффекторной каспазы с помощью анализа переноса энергии резонансного двойного флуоресценции. Дж. Фармакол. науч. 2005; 97: 361–368. doi: 10.1254/jphs.FP0040592. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

82. Ouyang M., Huang H., Shaner N.C., Remacle A.G., Shiryaev S.A., Strongin A.Y., Tsien R.Y., Wang Y. Одновременная визуализация активности протуморогенных src и mt1-mmp с резонансной передачей энергии флуоресценции. Рак рез. 2010;70:2204–2212. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-09-3698. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

83. Грант Д. М., Чжан В., МакГи Э.Дж., Банни Т.Д., Талбот С.Б., Кумар С., Мунро И., Дансби С., Нил М.А., Катан М. и др. Мультиплексированный FRET для отображения нескольких сигнальных событий в живых клетках. Биофиз. Дж. 2008; 95:L69–L71. doi: 10.1529/biophysj.108.139204. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

84. Su T., Pan S., Luo Q., Zhang Z. Мониторинг двойных биомолекулярных событий с использованием биосенсоров FRET на основе mtagbfp/sfgfp и Пары флуоресцентных белков mvenus/mkokappa. Биосенс. Биоэлектрон. 2013;46:97–101. doi: 10.1016/j.bios.2013.02.024. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

85. Ниино Ю., Хотта К., Ока К. Одновременная визуализация живых клеток с использованием двух датчиков FRET с одним возбуждающим светом. ПЛОС ОДИН. 2009; 4:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0006036. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

86. Гальперин Е., Верхуша В.В., Соркин А. Треххромофорная FRET-микроскопия для анализа мультибелковых взаимодействий в живых клетках. Нац. Методы. 2004; 1: 209–217. doi: 10.1038/nmeth720. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

87. Sun Y., Wallrabe H., Booker C.F., Day R.N., Periasamy A. Трехцветная спектральная FRET-микроскопия локализует три взаимодействующих белка в живых клетках. Биофиз. Дж. 2010; 99:1274–1283. doi: 10.1016/j.bpj.2010.06.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

88. Hoppe A.D., Scott B.L., Welliver T.P., Straight S.W., Swanson J.A. N-way FRET-микроскопия множественных белок-белковых взаимодействий в живых клетках. ПЛОС ОДИН. 2013;8:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0064760. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

89. Клейтон А.Х., Хэнли К.С., Арндт-Джовин Д.Дж., Субраманиам В., Джовин Т.М. Динамическая флуоресцентная визуализирующая микроскопия анизотропии в частотной области (rFLIM) Biophys. Дж. 2002; 83: 1631–1649. doi: 10.1016/S0006-3495(02)73932-5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

90. Bader A. N., Hofman E.G., Voortman J., en Henegouwen P.M., Gerritsen H.C. Визуализация Homo-FRET позволяет количественно определять размеры белковых кластеров с субклеточным разрешением. Биофиз. Дж. 2009; 97: 2613–2622. doi: 10.1016/j.bpj.2009.07.059. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

91. Devauges V., Marquer C., Lecart S., Cossec J.C., Potier M.C., Fort E., Suhling K., Leveque-Fort S. Гомодимеризация белка-предшественника амилоида на плазматической мембране: исследование homoFRET с помощью визуализации анизотропии флуоресценции с временным разрешением. ПЛОС ОДИН. 2012;7:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0044434. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

92. Нгуен А.В., Догерти П.С. Эволюционная оптимизация флуоресцентных белков для внутриклеточного FRET. Нац. Биотехнолог. 2005; 23: 355–360. doi: 10.1038/nbt1066. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

93. Линденбург Л.Х., Малисаускас М., Сипс Т., ван Оппен Л., Вейнандс С.П., ван де Грааф С. Ф., Меркс М. Количественная оценка липкости: термодинамическая характеристика внутримолекулярных доменных взаимодействий для руководства проектированием резонансных датчиков передачи энергии Форстера . Биохимия. 2014;53:6370–6381. doi: 10.1021/bi500433j. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

94. Линденбург Л., Меркс М. Разработка генетически закодированных датчиков FRET. Датчики. 2014;14:11691–11713. doi: 10.3390/s140711691. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Р., Маллабиабаррена А., Санхуан Х., Циммерманн Т. и соавт. Разработка слабых вспомогательных взаимодействий для высокоэффективных зондов FRET. Нац. Методы. 2013;10:1021–1027. doi: 10.1038/nmeth.2625. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

96. Wriggers W., Chakravarty S., Jennings P.A. Контроль функциональной динамики белков с помощью пептидных линкеров. Биополимеры. 2005; 80: 736–746. doi: 10.1002/bip.20291. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

97. Хорикава К., Ямада Ю., Мацуда Т. , Кобаяси К., Хашимото М., Мацу-ура Т., Мияваки А., Мичикава Т., Микошиба К., Нагаи Т. Спонтанная сетевая активность, визуализируемая с помощью сверхчувствительных индикаторов Ca(2+), желтый камелеон-нано. Нац. Методы. 2010;7:729–732. doi: 10.1038/nmeth.1488. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

98. Klarenbeek J., Goedhart J., van Batenburg A., Groenewald D., Jalink K. Датчики FRET четвертого поколения на основе epac для лагеря отличаются исключительной яркостью, фотостабильностью и динамический диапазон: характеристика специальных датчиков для FLIM, для ратиометрии и с высоким сродством. ПЛОС ОДИН. 2015;10:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0122513. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

99. Lissandron V., Terrin A., Collini M., D'Alfonso L., Chirico G., Pantano S., Zaccolo M. Улучшение основанного на FRET индикатора для цАМФ за счет конструкции линкера и стабилизации донор- Акцепторное взаимодействие. Дж. Мол. биол. 2005; 354: 546–555. doi: 10.1016/j. jmb.2005.09.089. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

100. Сиварамакришнан С., Спудич Дж.А. Систематический контроль взаимодействия белков с помощью модульного линкера er/k альфа-спирали. проц. Натл. акад. науч. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2011;108:20467–20472. doi: 10.1073/pnas.1116066108. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

101. Комацу Н., Аоки К., Ямада М., Юкинага Х., Фудзита Ю., Камиока Ю., Мацуда М. Разработка оптимизированной основы биосенсоров FRET для киназ и гтпаз. Мол. биол. Клетка. 2011; 22:4647–4656. doi: 10.1091/mbc.E11-01-0072. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

102. Гейгер А., Руссо Л., Генш Т., Теструп Т., Беккер С., Хопфнер К.П., Гризингер К., Витте Г., Грисбек О. Корреляция связывания кальция, резонансной передачи энергии Форстера и конформационных изменений в биосенсоре tn-xxl. Биофиз. Дж. 2012; 102:2401–2410. doi: 10.1016/j.bpj.2012.03.065. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

103. Spencer S.L., Cappell S.D., Tsai F.C., Overton K.W., Wang C.L., Meyer T. Решение о пролиферации и покое контролируется бифуркацией активности cdk2 на выходе из митоза. Клетка. 2013; 155:369–383. doi: 10.1016/j.cell.2013.08.062. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

104. Регот С., Хьюи Дж. Дж., Баджар Б. Т., Карраско С., Коверт М. В. Высокочувствительные измерения активности нескольких киназ в живых одиночных клетках. Клетка. 2014; 157:1724–1734. doi: 10.1016/j.cell.2014.04.039. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

105. Chen T.W., Wardill T.J., Sun Y., Pulver S.R., Renninger S.L., Baohan A., Schreiter E.R., Kerr R.A., Orger M.B., Jayaraman V. ., и другие. Сверхчувствительные флуоресцентные белки для визуализации активности нейронов. Природа. 2013; 499: 295–300. doi: 10.1038/nature12354. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

106. St-Pierre F., Marshall J.D., Yang Y., Gong Y., Schnitzer M.J., Lin M. Z. Высокоточные оптические отчеты об электрической активности нейронов с помощью сверхбыстрого флуоресцентного датчика напряжения. Нац. Неврологи. 2014; 17: 884–889.. doi: 10.1038/nn.3709. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

107. Betollngar D.B., Erard M., Pasquier H., Bousmah Y., Diop-Sy A., Guiot E., Vincent P., Merola F ● рН-чувствительность репортеров FRET на основе голубых и желтых флуоресцентных белков. Анальный. Биоанал. хим. 2015; 407:4183–4193. doi: 10.1007/s00216-015-8636-z. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

108. Esposito A., Gralle M., Dani M.A., Lange D., Wouters F.S. Phlameleons: семейство белковых сенсоров на основе FRET для количественной визуализации ph. Биохимия. 2008;47:13115–13126. дои: 10.1021/bi8009482. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

109. Zacharias D.A., Violin J.D., Newton A.C., Tsien R.Y. Разделение модифицированных липидами мономерных gfps на мембранные микродомены живых клеток. Наука. 2002; 296:913–916. doi: 10.1126/science.1068539. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

110. Shaner N.C., Campbell R.E., Steinbach P.A., Giepmans B.N., Palmer A.E., Tsien R.Y. Усовершенствованные мономерные красные, оранжевые и желтые флуоресцентные белки, полученные из Discosoma sp. Красный флуоресцентный белок. Нац. Биотехнолог. 2004; 22:1567–1572. doi: 10.1038/nbt1037. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

111. Kredel S., Oswald F., Nienhaus K., Deuschle K., Rocker C., Wolff M., Heilker R., Nienhaus G.U., Wiedenmann J. Mruby, яркий мономерный красный флуоресцентный белок для мечения субклеточных структуры. ПЛОС ОДИН. 2009; 4:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0004391. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

112. Шемякина И.И., Ермакова Г.В., Крэнфилл П.Дж., Бэрд М.А., Эванс Р.А., Соуслова Е.А., Староверов Д.Б., Гороховатский А.Ю., Путинцева Е.В., Городничева Т.В., и др. др. Мономерный красный флуоресцентный белок с низкой цитотоксичностью. Нац. коммун. 2012;3:1204. doi: 10.1038/ncomms2208. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

113. Уэда Ю., Квок С., Хаяши Ю. Применение зондов FRET в анализе пластичности нейронов. Передние нейронные цепи. 2013;7:163. doi: 10.3389/fncir.2013.00163. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

114. Kiyokawa E., Aoki K., Nakamura T., Matsuda M. Пространственно-временная регуляция малых gtpases по данным зондов на основе принципа резонанса Форстера перенос энергии (FRET): значение для передачи сигналов и фармакологии. Анну. Преподобный Фармакол. Токсикол. 2011;51:337–358. doi: 10.1146/annurev-pharmtox-010510-100234. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

115. Лу С., Ван Ю. Флуоресцентные резонансные биосенсоры с переносом энергии для обнаружения рака и оценки эффективности лекарств. клин. Рак рез. 2010;16:3822–3824. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-10-1333. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

116. Bozza W.P., Di X., Takeda K., Rivera Rosado L.A., Pariser S. , Zhang B. Использование стабильно экспрессируемого биосенсора FRET для определение действия противораковых препаратов. ПЛОС ОДИН. 2014;9:1488. doi: 10.1371/journal.pone.0107010. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

117. Морозова К.С., Пяткевич К.Д., Гулд Т.Дж., Чжан Дж., Беверсдорф Дж., Верхуша В.В. Дальнекрасный флуоресцентный белок, возбуждаемый красными лазерами, для проточной цитометрии и наноскопии сверхвысокого разрешения. Биофиз. Дж. 2010;99:L13–L15. doi: 10.1016/j.bpj.2010.04.025. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

118. Lee SJ, Escobedo-Lozoya Y., Szatmari EM, Yasuda R. Активация camkii в одиночных дендритных шипиках во время долговременной потенциации. Природа. 2009; 458: 299–304. doi: 10.1038/nature07842. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

119. Палмер А.Е., Цинь Ю., Парк Дж.Г., МакКомбс Дж.Е. Дизайн и применение генетически кодируемых биосенсоров. Тенденции биотехнологии. 2011;29:144–152. doi: 10.1016/j.tibtech.2010.12.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

FRET: сигналы, скрытые в шуме

  • Список журналов
  • Рукописи авторов HHS
  • PMC4360877

Цитометрия А. Авторская рукопись; доступно в PMC 2015 Mar 16.

Опубликовано в окончательной редакции как:

Cytometry A. 2014 Nov; 85 (11): 918–920.

Опубликовано онлайн 2014 сентября 19. DOI: 10.1002/cyto.a.22568

PMCID: PMC4360877

NIHMSID: NIHMS666967

PMID: 25241962

1, 6868 68 68 68 68

8 68

8

8

8

8

8

8

8

8

8 968

1,

. 0267 2, 3, * и 2, 3, 4

Информация об авторе Примечания к статье Информация об авторских правах и лицензии Заявление об отказе от ответственности чрезвычайно полезным для научного сообщества, позволяя изучать широкий спектр наноразмерных измерений, зависящих от расстояния. FRET происходит, когда энергия безызлучательно передается от возбужденного флуорофора (донорный флуорофор) ко второму флуорофору, находящемуся в непосредственной близости (акцепторному флуорофору) (1,2). Поскольку скорость, с которой энергия передается от донора к акцепторному флуорофору, зависит от межмолекулярного расстояния в шестой степени, FRET обеспечивает высокочувствительную меру межмолекулярного расстояния (2,3). Ключевым параметром в измерениях FRET является эффективность FRET. Эффективность FRET чаще всего описывается как отношение количества квантованных энергетических событий (иногда называемых виртуальными фотонами (4)), переданных от донорного флуорофора к акцепторному флуорофору, к общему количеству квантованных энергетических событий (фотонов), поглощенных донорным флуорофором (5). При использовании соответствующих методов измерения и вычислений эффективность FRET представляет собой количественное значение, описывающее межмолекулярное расстояние и ориентацию в образце. Было показано, что для флуорофоров с фиксированным межмолекулярным расстоянием значение измеренной эффективности FRET является относительно постоянным, независимо от используемого метода измерения (6). Следовательно, репортеры FRET могут использоваться для получения абсолютных количественных данных, описывающих меж- и внутримолекулярные взаимодействия.

Вычисление эффективности FRET, будь то измерения флуоресцентной микроскопии или проточной цитометрии, обычно требует логометрического расчета (7). Поскольку эффективность FRET для биологических репортеров часто колеблется от 20 до 60%, флуоресцентное излучение акцепторного флуорофора при возбуждении за счет переноса энергии обычно обеспечивает меньшую силу сигнала, чем измерения излучения акцепторного флуорофора в результате прямого возбуждения. Выполнение логометрических вычислений с использованием относительно слабых сигналов в качестве входных данных может привести к распространению ошибки компаундирования (8). Таким образом, в то время как FRET как инструмент предлагает возможность исследовать молекулярные расстояния в изображениях или данных проточной цитометрии, он также вводит существенные ограничения в чувствительности и дисперсии из-за низкой мощности сигнала.

Низкий уровень сигнала также может ограничивать пространственное и временное разрешение. При проведении экспериментов FRET обычно приходится искать компромисс между силой сигнала (точностью расчета эффективности FRET), пространственным разрешением и временным разрешением. Например, при использовании репортера FRET для изучения высокоскоростных сигнальных событий вероятным компромиссом будет пожертвовать пространственным разрешением, возможно, даже провести эксперимент в объемном растворе, чтобы поддерживать адекватную мощность сигнала и позволить интерпретировать результаты. Эти компромиссы могут наложить большие ограничения на использование репортеров FRET для измерения событий передачи сигналов в одной клетке, особенно тех, которые происходят с высокой скоростью или в отдельных областях клетки. Усугубляют неотъемлемые ограничения мощности сигнала ограничения, возникающие из-за одновременных логометрических измерений двух флуоресцентных молекул (трех, если рассматривается тримолекулярный FRET). Эти ограничения включают дифференциальное фотообесцвечивание, относительные изменения концентрации флуорофоров и изменения условий окружающей среды (pH, ионные градиенты, показатель преломления), что требует использования тщательно спланированных экспериментальных контролей (9).).

Два класса подходов были разработаны для преодоления ограничений измерения FRET: новые стратегии инструментов/измерений и новые вычислительные инструменты. Первый класс подходов, инструменты и стратегии измерения, включает такие методы, как фотообесцвечивание акцептора, время жизни флуоресценции, спектральное изображение и анизотропия флуоресценции. На самом деле, в настоящее время существует такой широкий спектр технологических вариантов измерения FRET, что может быть трудно оценить, какой вариант подходит для данной экспериментальной ситуации. В наилучших условиях, когда выполняется с высокой эффективностью возбуждения, высокой квантовой эффективностью и химически стабильными флуорофорами, FRET можно точно измерить с использованием стандартных конфигураций эпифлуоресцентного микроскопа. В других случаях, однако, требуется сложная аппаратура для точной оценки изменений эффективности FRET. Вполне вероятно, что новые цитометрические технологии и подходы к биологической маркировке будут продолжать разрабатываться, чтобы обеспечить FRET-анализы с повышенной чувствительностью, уменьшенной дисперсией и расширенным динамическим диапазоном.

Второй класс подходов для преодоления ограничений измерения FRET заключается в повышении точности вычислительных инструментов, используемых при расчете эффективности FRET. Этот подход используют Nagy et al. в статье — Оценка максимального правдоподобия (MLE) эффективности FRET и ее влияние на искажения при попиксельном расчете FRET в микроскопии — на странице 942 в этом выпуске Cytometry, Part A (10). В этой статье авторы используют MLE для расчета эффективности FRET на основе данных, полученных с помощью детектора счета фотонов. Также рассчитываются дополнительные параметры, связанные с FRET, такие как коэффициенты спектрального переполнения. Эффективность подхода MLE оценивалась с использованием серии теоретических симуляций методом Монте-Карло FRET, эксперимента in vitro с использованием набора «стандартов» флуоресцентного белка FRET (6) и ex vivo среза ткани. Показано, что наиболее существенные улучшения метода MLE (по сравнению со стандартными попиксельными методами или методами полной интенсивности) происходят, когда поток фотонов очень низок. Это улучшение происходит потому, что предлагаемый метод MLE учитывает статистику Пуассона, присущую измерениям на основе фотонов. В дополнение к повышению точности вычислений FRET подход MLE также может хорошо работать для удаления пикселей с выбросами, которые часто встречаются при выполнении FRET с флуоресцентным излучением низкой интенсивности. Чтобы сделать оценки MLE, используются все пиксели в пределах поля зрения, что приводит к одному значению эффективности FRET для каждого изображения. Для многих анализов требуется ансамблевый ответ. Однако авторы также демонстрируют, что подходы MLE могут использоваться для расчета эффективности FRET в пространственном подмножестве (области) изображения. Этот подход может иметь большое значение для исследователей, выполняющих измерения низкого отношения сигнал-шум или высокоскоростных FRET.

За последнее десятилетие мы стали свидетелями значительного расширения разнообразия инструментов флуоресцентной микроскопии, надстроек и подходов, которые открыли новые возможности для пространственного, временного разрешения и разрешения по длине волны, а также улучшили выборку спектров и чувствительность. Это привело к все более количественным, автоматизированным и сложным исследованиям микроскопии одиночных клеток. Интересно, что многие из этих новых технологий, вместо того, чтобы сделать FRET-тесты устаревшими, повысили доступность и точность подходов FRET. Эта тенденция, вероятно, сохранится. Например, можно представить трехмерные FRET-анализы со сверхвысоким разрешением, которые будут очень полезными. Способность точно оценивать эффективность FRET в органеллах, суборганеллярных регионах, эндосомах или микрочастицах может изменить наше понимание локализованных сигнальных доменов и компартментализации клеточных сигналов, что обсуждается в (11,12). Точно так же возможность точного измерения FRET с помощью высокоскоростной покадровой микроскопии важна для понимания тонких кинетических явлений. Можно представить себе сценарии, требующие как высокого разрешения, так и высокой скорости, такие как измерение сигналов циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), продуцируемых активированными эндосомальными сигнальными комплексами, когда они проходят через мигрирующие клетки. Хотя эти сценарии зависят от усовершенствованных технологий микроскопии, вполне вероятно, что они также потребуют достижений в методах анализа, таких как статистические подходы, описанные Nagy et al., а также подходы цитометрии изображений, которые используют улучшенные алгоритмы для автоматизированного анализа изображений, клеток. сегментация и извлечение признаков. На самом деле, вполне вероятно, что именно на стыке множества технологических усовершенствований — улучшенного оборудования микроскопа, улучшенных вычислений FRET и улучшенных алгоритмов сегментации изображений и выделения признаков — мы осознаем наибольшее влияние на локализованные, одноклеточные и субклеточные измерения FRET.

Спонсор гранта: NIH; Номер гранта: P01 HL066299

Спонсор гранта: Фонд исследования рака Авраама Митчелла.

1. Förster T. Energiewanderung und fluoreszenz. Натурвиссеншафтен. 1946; 33: 166–175. [Google Scholar]

2. Förster T. Zwischenmolekulare energiewanderung und fluoreszenz. Аннален дер Physik. 1948; 437: 55–75. [Google Scholar]

3. Stryer L, Haugland RP. Перенос энергии: спектроскопическая линейка. Proc Natl Acad Sci USA. 1967; 58: 719–726. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

4. Скоулз Г.Д. Дальний резонансный перенос энергии в молекулярных системах. Annu Rev Phys Chem. 2003; 54: 57–87. [PubMed] [Google Scholar]

5. Клегг Р.М. Резонансный перенос энергии флуоресценции. Курр Опин Биотехнолог. 1995; 6: 103–110. [PubMed] [Google Scholar]

6. Кошик С.В., Чен Х., Талер С., Пул Х.Л., III, Фогель С.С. Эталонные стандарты Cerulean, Venus и VenusY67C FRET. Биофиз Дж. 2006; 91: L99–L101. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

7. Соллёши Дж., Дамьянович С., Надь П., Вереб Г., Матюс Л. Принципы резонансной передачи энергии. Карр Проток Цитом. 2006; 38:1.12.1–1.12.16. [Академия Google]

8. Berney C, Danuser G. FRET или отсутствие FRET: количественное сравнение. Биофиз Дж. 2003; 84: 3992–4010. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

9.


Learn more


Оцените статьюПлохая статьяСредненькая статьяНормальная статьяНеплохая статьяОтличная статья (проголосовало 13 средний балл: 5,00 из 5)