Как определить качество сцепления


Как проверить сцепление самому?

Шумы и посторонние стуки – стандартные признаки неполадки сцепления, которые могут возникать в самых разных ситуациях. Также при этом имеет место неполное включение или выключение, залипание педали, пробуксовка. Если какая-либо из перечисленных неполадок есть, то необходимо проверить сцепление. Как это сделать? Об этом мы и поговорим в данной статье.

Как проверить сцепление?

Есть несколько методик проверки. Основная базируется на использовании измерительного оборудования, которого у вас, скорее всего, нет. Речь идет о специальном измерительном калибре. Плюс такого способа заключается в том, что диски сцепления не требуют демонтажа – автомобиль достаточно поднять на подъемнике.

На такую проверку уйдет много времени, но зато метод позволит получить точный результат. Такой способ проверки применяется на СТО. Как проверить сцепление на машине еще? Есть и другие альтернативные методы, которые не требуют оборудования.

Проверка при проскальзывании

Такая проверка производится в том случае, если есть предпосылки к неправильной работе сцепления. Но в зависимости от характера поломки методика может отличаться. Самая распространенная ситуация – это проскальзывание сцепления. В этом случае правильность его работы проверяется следующим образом:

  1. Ставим автомобиль на ручник.
  2. Запускаем мотор.
  3. Активируем третью передачу (можно четвертую).
  4. Выжимаем сцепление и выдавливаем педаль газа.

Если мотор при этом заглох, то, скорее всего, диск сцепления изношен и требует замены. Однако подобный результат не всегда точен.

Проверка пробуксовки

Как проверить диск сцепления еще? Второй способ не предполагает использования каких-либо специальных методик. Водителю при езде в городском режиме просто необходимо внимательно следить за поведением автомобиля. Например, если машина очень тяжело едет вверх, присутствует запах гари или падение скорости без видимых причин, то имеет место пробуксовка. В этом случае можно попытаться заменить диск сцепления, однако в данном случае виновниками подобного поведения транспорта могут быть и другие элементы системы, а сцепление может оказаться исправным. Так что потребуется дополнительная диагностика.

Когда сцепление "ведет"

Когда сцепление "ведет", то появляются неприятные звуки из коробки передач, а передачи включать становится труднее. В этом случае есть способ, как проверить сцепление:

  1. Включаем мотор, выставляем нейтральную передачу.
  2. Выжимаем педаль сцепления.
  3. Включаем первую скорость.

Если при активации передачи приходится прикладывать усилия и при этом имеют место странные звуки из коробки, то это в первую очередь говорит о том, что диск маховика не отцепляется. Чаще всего подобная проблема решается с помощью прокачки гидравлики и регулировки педали.

Проверка износа диска

Напомним, что диск сцепления обязательно имеет свой ресурс. Многие владельцы автомобилей забывают о нем и меняют только тогда, когда ездить на машине становится некомфортно. В городском режиме движения этот ресурс уменьшается быстро, и если машина "пробежала" около 70-80 тысяч километров в городе, то диск сцепления просто обязан "барахлить". Однако при движении на трассах машина может проехать и более 300 тысяч километров без замены диска сцепления.

Проще всего определить степень износа диска сцепления с помощью хода педали. Для этого необходимо:

  1. Установить машину на ровную площадку.
  2. Завести двигатель и прогреть до рабочей температуры.
  3. Включить первую передачу и медленно отпускать сцепление. При этом нельзя допускать, чтобы двигатель заглох. Обращаем внимание, на каком моменте начинается передача крутящего момента на колеса. При появлении вибрации на кузове машины прекращаем проверку.

Если сцепление начало схватывать в самом начале хода педали, то это говорит о том, что с диском все в порядке и его степень износа либо низкая, либо она вообще отсутствует (диск новый). Если схватывание осуществляется в середине хода педали, то это может свидетельствовать об износе диска, но не всегда. На некоторых машинах может быть подобная регулировка педали, при которой диск схватывает на средине хода педали.

В том случае, если схватывание осуществляется в самом конце хода педали или вообще имеет место пробуксовка, то это говорит об изношенном диске, который требует замены. При наличии запаха гари диск сцепления нужно менять срочно, иначе есть риск повреждения маховика.

Проверка выжимного подшипника

Недостаточно просто знать, как проверить сцепление. Также нужно уметь проверять выжимной подшипник, т. к. этот элемент в системе трансмиссии играет важную роль. Часто его поломку путают с поломкой всей системы сцепления.

Проверка осуществляется при нажатой педали сцепления, т. к. именно в этом положении осуществляется передача крутящего момента на подшипник. Он отходит и тянет за собой диск сцепления. Поэтому не рекомендуют удерживать нажатой педаль сцепления слишком долго, т. к. это оказывает нестабильные нагрузки на данную деталь и ведет к ее быстрому износу.

Явный признак износа подшипника – звуки при нажатой педали сцепления (стуки, шорохи). Впрочем, если подобные звуки появляются в холодное время, то волноваться не стоит. Эта деталь при низких температурах имеет малый коэффициент расширения из-за высокой прочности стали. А сам стакан, где находится узел целиком, имеет высокой коэффициент расширения. Поэтому при нагреве звук должен пропасть.

Кроме этого, имеют место и другие признаки, которые говорят о неисправности сцепления: некорректное переключение передач, невозможность включить некоторые передачи вообще. Также стоит обратить внимание на дергание автомобиля при езде на скоростях.

Как проверить цилиндры сцепления?

При неисправных цилиндрах автомобиль может либо не реагировать на нажатие педали сцепления вообще, либо реагировать неправильно. Часто автовладельцы, у которых не работает главный или вспомогательный цилиндр, жалуются, что автомобиль начинает движение даже при нажатой педали сцепления. Это в первую очередь говорит о неисправном цилиндре. Проверить их достаточно просто: учитывая, что ломаться там особо нечему, нужно только проверить, есть ли подтеки жидкости в салоне (сразу над педалью сцепления и под капотом). Если подтеков нет, то, скорее всего, с цилиндрами все в порядке.

Заключение

Теперь вы знаете, как проверить сцепление. Конечно, высокую точность проверки никто гарантировать не может, поэтому в любом случае при подозрении на неисправность желательно обращаться на СТО. Там точно знают, как проверить сцепление ВАЗ и других марок автомобилей, включая редкие иномарки. На некоторых автомобилях зарубежного производства описанные выше способы не работают.

Облегчение симптомов, удаление и многое другое

Что такое спаечные процессы при эндометриозе?

Эндометриоз возникает, когда клетки, которые ваша матка сбрасывает каждый месяц во время менструации, начинают расти за пределами вашей матки.

Когда эти клетки набухают и ваша матка пытается избавиться от них, область вокруг них воспаляется. Одна пораженная область может прилипнуть к другой пораженной области, поскольку обе области пытаются исцелить. Это создает полосу из рубцовой ткани, известную как спай.

Спайки чаще всего встречаются в области таза, вокруг яичников, матки и мочевого пузыря.Эндометриоз - одна из наиболее частых причин, по которым у женщин появляются спаечные процессы, не связанные с предыдущей операцией.

Не существует известного способа предотвратить образование спаек, но существуют варианты обезболивания и медицинские процедуры, которые могут помочь вам справиться с ними. Продолжайте читать, чтобы узнать больше.

Хотя спайки могут повлиять на симптомы эндометриоза, важно понимать, что спайки имеют свой собственный набор отдельных симптомов. Вот почему, когда у вас развиваются спаечные процессы при эндометриозе, ваши симптомы могут измениться.

Спайки могут вызывать:

Вы также можете чувствовать боль другого рода до и во время менструации. Женщины со спайками описывают боль как скорее внутреннюю колющую боль, чем тупую и постоянную пульсацию, которая сопровождает эндометриоз.

Ваши повседневные движения и пищеварение могут вызвать симптомы спаек. Это может вызвать ощущение, будто внутри вас что-то тянут.

Когда у вас есть спаечный процесс эндометриоза, поиск способа управлять своими симптомами может быть процессом.У разных людей работают разные вещи. Обезболивающие, отпускаемые без рецепта, такие как ибупрофен (Адвил) и ацетаминофен (Тайленол), могут помочь уменьшить боль, но иногда их недостаточно.

Сидение в теплой ванне или полулежание с бутылкой с горячей водой, когда ваша боль обостряется, может помочь расслабить мышцы и облегчить боль от спаек. Ваш врач может также порекомендовать методы массажа и физиотерапию, чтобы попытаться разрушить рубцовую ткань и уменьшить боль.

Это состояние может повлиять на вашу сексуальную жизнь, социальную жизнь и ваше психическое здоровье.Обсуждение этих побочных эффектов с лицензированным специалистом в области психического здоровья поможет вам справиться с любыми чувствами депрессии или беспокойства, которые вы можете испытывать.

Удаление адгезии несет в себе риск возврата адгезии или возникновения новых спаек. Важно помнить об этом риске, когда вы думаете об удалении спаек эндометриоза.

Спайки удаляются с помощью хирургического вмешательства, называемого адгезиолизом. Местоположение спаечной ткани определит, какое хирургическое лечение вам больше всего подходит.

Например, лапароскопическая операция менее инвазивна и может разрушить и удалить спайки, которые блокируют кишечник. Кроме того, лапароскопическая операция с меньшей вероятностью приведет к образованию большего количества спаек в процессе заживления.

Некоторые процедуры адгезиолиза необходимо выполнять с использованием традиционного хирургического оборудования вместо лазера. Операция по удалению спаек проводится под общим наркозом и в условиях больницы из-за риска заражения. Время восстановления может варьироваться в зависимости от размера вашего разреза.

Необходимы дополнительные исследования результатов удаления спаек. Вероятность успеха зависит от области вашего тела, где находится спайка. Операции по поводу спаек кишечника и брюшной стенки, как правило, имеют более низкую скорость восстановления спаек после операции.

Q:

Кому следует удалять адгезию?

Анонимный пациент

A:

Эндометриоз может поражать до 15 процентов женщин в пременопаузе, и все же женщины могут оставаться недиагностированными в течение многих лет.Эндометриоз может влиять на качество повседневной жизни, оказывая волновое влияние на вашу жизнь, отношения, род занятий, фертильность и психологическое состояние. Это плохо изученное заболевание, без анализа крови для постановки диагноза и без четкого пути для эффективного лечения.

Принятие решения о лечении необходимо тщательно обсудить с учетом ваших будущих запланированных беременностей. Если вы хотите иметь детей, план может быть другим, чем если бы вы больше не рожали.

Поговорите со своим врачом о лечении.Гормональное лечение может помочь справиться с симптомами в течение нескольких лет.

Хирургические процедуры обычно предлагаются, когда гормональные или другие методы лечения больше не приносят облегчения. Существует значительный риск того, что спайки могут вернуться после любой операции на брюшной полости и спайки могут ухудшиться. Но для тех, кто живет с эндометриозом, который ежедневно влияет на работу, семью и функционирование, операция - это вариант.

Задайте вопросы об использовании хирургических процедур, таких как пленки или спрей во время операции, чтобы уменьшить развитие спаек в дальнейшем.Выполнение операции лапароскопически (через небольшой разрез и камеру) снизит вероятность развития спаек. Проведите исследование и станьте информированным потребителем вашего медицинского обслуживания.

Дебра Роуз Уилсон, доктор философии, MSN, RN, IBCLC, AHN-BC, CHT Ответы отражают мнение наших медицинских экспертов. Весь контент носит исключительно информационный характер и не может рассматриваться как медицинский совет.

Процедуры по удалению ткани эндометрия из таза и других областей сопряжены с высоким риском образования спаек.Любая операция на брюшной полости может привести к увеличению спаек.

Во время заживления после любой операции ваши органы и окружающие ткани опухают по мере заживления. Это очень похоже на порез на коже: до того, как образуется струп, ваша кожа слипается, так как сгустки крови являются частью процесса заживления вашего тела.

Когда у вас есть спайки, рост новой ткани и естественный процесс заживления вашего тела могут создать рубцовую ткань, которая блокирует ваши органы или ухудшает их функцию. Органы вашей пищеварительной и репродуктивной систем расположены очень близко друг к другу в брюшной полости и тазу.Близкое расположение мочевого пузыря, матки, фаллопиевых труб и кишечника означает, что спайки могут возникнуть после любой операции на этой области.

Невозможно предотвратить образование спаек после операции на брюшной полости. Некоторые спреи, жидкие растворы, лекарства и хирургические методы исследуются, чтобы найти способ уменьшить спайки после операции.

Спайки эндометриоза могут усложнить и без того дискомфортное состояние. Знание стратегий лечения и контроля спаечной боли может помочь.

Если вам поставили диагноз эндометриоз и вы чувствуете, что ваша боль отличается от обычной, обратитесь к врачу. Вам также следует обратиться к врачу при появлении новых симптомов, таких как колющая боль, запор или жидкий стул.

.

Роль спаек брюшной полости у лошадей и современные стратегии профилактики

Внутрибрюшные спайки представляют собой серьезную клиническую и хирургическую проблему, которая может привести к таким осложнениям, как боль и окклюзия кишечника или субокклюзия. Эти спайки вызывают разочарование и могут привести к летальному исходу и представляют собой серьезное послеоперационное осложнение абдоминальной хирургии. Подсчитано, что у 32% лошадей, перенесших лапаротомию, будут проявляться клинические симптомы из-за спаек, но истинная распространенность неизвестна, поскольку значительная часть животных с послеоперационными рецидивирующими коликами проходит медикаментозное лечение или подвергается эвтаназии без вскрытия трупа.Спайки - это высококлеточные, васкуляризованные, динамические структуры, на которые влияют сложные сигнальные механизмы. Понимание их патогенеза может помочь в применении лучших терапевтических стратегий и разработке более эффективных антиадгезионных продуктов. В настоящее время не существует окончательных стратегий, предотвращающих образование спаек, и трудно интерпретировать результаты существующих исследований из-за нестандартности индукционной модели и оценки их серьезности. Наилучшие клинические результаты были получены при использовании минимально травматичных хирургических техник, противовоспалительных средств, противомикробных препаратов, антикоагулянтов и механического разделения серозных поверхностей с помощью вязких внутрибрюшинных растворов или физических барьеров.Эта статья направлена ​​на обзор патогенеза образования спаек, руководство пониманием основных продуктов и лекарств, используемых для ингибирования образования спаек, и изучение их эффективности у лошадей.

1. Введение

Внутрибрюшные спайки у людей и животных представляют собой значительную клиническую и хирургическую проблему, которая может привести к таким осложнениям, как боль, бесплодие, окклюзия или субокклюзия кишечника [1–4]. Эти спайки также имеют большие экономические последствия из-за хирургических и больничных расходов [2, 5].Образование спаек - наиболее частая причина послеоперационных колик и вторая по частоте причина повторных циотомий [6–8]. Поэтому они вызывают разочарование у ветеринаров и хирургов, что стимулировало исследования продуктов и методов, предотвращающих их образование [9].

Хотя триггерные механизмы образования спаек остаются неясными, возможные причины - ишемия, хирургическая травма, воспаление, кровоизлияние, термическое или химическое повреждение, генетическая предрасположенность и реакции на инородные тела [1, 5].

.

PDB-101: Learn: Руководство по пониманию данных PDB: методы определения структуры

В настоящее время используется несколько методов для определения структуры белка, включая рентгеновскую кристаллографию, ЯМР-спектроскопия и электронная микроскопия. У каждого метода есть свои преимущества и недостатки. В каждом из этих методов ученый использует много информации для создания окончательной модели атома. В первую очередь у ученого есть своего рода экспериментальные данные о строении молекулы.Для рентгеновской кристаллографии это рентгеновский дифракционная картина. Для ЯМР-спектроскопии это информация о локальной конформации и расстоянии между атомы, которые находятся близко друг к другу. В электронной микроскопии это изображение общей формы молекулы.

В большинстве случаев этой экспериментальной информации недостаточно для построения атомной модели с нуля. Дополнительные необходимо добавить знания о молекулярной структуре. Например, мы часто уже знаем последовательность амино кислоты в белке, и мы знаем предпочтительную геометрию атомов в типичном белке (например, длины связей и валентные углы).Эта информация позволяет ученому построить модель, совместимую с экспериментальными данными. данные и ожидаемый состав и геометрия молекулы.

При просмотре записей PDB всегда полезно быть немного критичным. Имейте в виду, что структуры в PDB архив определяются с использованием сбалансированного сочетания экспериментального наблюдения и моделирования на основе знаний. Это часто стоит потратить немного больше времени, чтобы убедиться в том, что экспериментальные данные для конкретной структуры поддерживает модель в том виде, в каком она представлена, и научные выводы, основанные на модели.


Рентгеновская кристаллография

Большинство структур, включенных в архив PDB, были определены с помощью рентгеновской кристаллографии. Для этого метода белок очищают и кристаллизуют, а затем подвергают интенсивному облучению рентгеновскими лучами. Белки в кристалле дифрагируют рентгеновский луч, образуя тот или иной характерный узор из пятен, которые затем анализируются (с помощью некоторых хитрых методов определения фазы рентгеновской волны в каждом пятне) для определения распределения электронов в белке.Результирующая карта электронной плотности имеет вид затем интерпретируется для определения местоположения каждого атома. Архив PDB содержит два типа данных для кристаллические структуры. Файлы координат включают атомные позиции для окончательной модели конструкции, а файлы данных включают структурные факторы (интенсивность и фазу рентгеновских пятен в дифрактограмма) от определения структуры. Вы можете создать изображение электронной плотности карту с помощью таких инструментов, как программа просмотра Astex, доступная по ссылке на странице «Сводная информация о структуре».

Рентгеновская кристаллография может предоставить очень подробную атомную информацию, показывая каждый атом в белке или нуклеиновой кислоты вместе с атомными деталями лигандов, ингибиторов, ионов и других молекул, которые включены в кристалл. Однако процесс кристаллизации труден и может ограничения на типы белков, которые могут быть изучены этим методом. Например, рентгеновская кристаллография. это отличный метод для определения структур жестких белков, которые образуют красивые упорядоченные кристаллы.Гибкие белки, с другой стороны, гораздо труднее изучать этим методом, потому что кристаллография полагается на наличие множества молекул, выровненных в одной и той же ориентации, как повторяющийся узор в обои на стену. Гибкие части белка часто не видны на кристаллографических картах электронной плотности. поскольку их электронная плотность будет размазана по большому пространству. Более подробно это описано на странице о недостающих координатах.

Кристаллы биологических молекул привередливы: одни образуют идеальные, хорошо упорядоченные кристаллы, а другие - только бедные кристаллы.Точность определения атомной структуры зависит от качества этих кристаллов. В идеальных кристаллах у нас гораздо больше уверенности в том, что атомная структура правильно отражает структуру белок. Двумя важными показателями точности кристаллографической структуры являются ее разрешение, которое измеряет количество деталей, которые можно увидеть в экспериментальных данных, а R-значение, которое измеряет насколько хорошо атомная модель поддерживается экспериментальными данными, найденными в файле структурного фактора.

Здесь показана экспериментальная электронная плотность структуры ДНК. (Запись в PDB 196d) вместе с атомарной моделью, которая была создана на основе данные. Контуры окружают области с высокой плотностью электронов, которые соответствуют атомам в молекуле.

В рамках процесса биодокументации wwPDB генерирует отчеты о валидации, которые предоставляют оценку качества конструкции с использованием широко принятых стандартов и критериев.Эти отчеты включают в себя краткое изображение ключевых показателей качества, чтобы помочь неспециалистам интерпретировать эти отчеты. Для получения дополнительной информации посетите wwpdb.org.


Изучение биологической структуры и функций с помощью лазеров на свободных электронах (XFEL)

Новая технология, называемая последовательной фемтосекундной кристаллографией, революционизирует методы рентгеновской кристаллографии. Рентгеновский лазер на свободных электронах (XFEL) используется для создания чрезвычайно коротких (продолжительностью всего фемтосекунд) и чрезвычайно ярких импульсов излучения.Поток крошечных кристаллов (размером от нанометров до микрометров) проходит через луч, и каждый импульс рентгеновского излучения создает дифракционную картину от кристалла, часто сгорая в процессе. Полный набор данных составляется из десятков тысяч этих отдельных дифракционных картин. Этот метод очень мощный, потому что он позволяет ученым изучать молекулярные процессы, которые происходят в очень коротких временных масштабах, такие как поглощение света биологическими хромофорами.

Структуры фотоактивного желтого белка определяли с помощью серийной фемтосекундной кристаллографии после освещения, фиксируя изомеризацию хромофора после того, как он поглощает свет.Структуры, включенные в этот фильм, включают: 5hd3 (основное состояние), 5hdc (100-400 фемтосекунд после освещения), 5hdd (800-1200 фемтосекунд), 5hds (3 пикосекунды), 4b9o (100 пикосекунд), 5hd5 (200 наносекунд) и 1ts0. (1 миллисекунда). Для получения дополнительной информации см. Молекула месяца в фотоактивном желтом белке.


ЯМР-спектроскопия

ЯМР-спектроскопия может использоваться для определения структуры белков. Белок очищен, помещают в сильное магнитное поле, а затем исследуют радиоволнами.Отличительный набор наблюдаемых резонансы могут быть проанализированы, чтобы дать список атомных ядер, которые близки друг к другу, и характеризуют локальную конформацию связанных вместе атомов. Этот список ограничений затем используется для построения модели белка, которая показывает расположение каждого атома. Техника в настоящее время ограничивается небольшими или средними белками, поскольку большие белки представляют проблемы с перекрытием пики в спектрах ЯМР.

Основное преимущество ЯМР-спектроскопии заключается в том, что она дает информацию о белках в растворе, в отличие от тех, которые заперты в кристалле или привязаны к сетке микроскопа, и, таким образом, спектроскопия ЯМР является основным методом изучения атомных структур гибких белков.Типичная структура ЯМР будет включать в себя ансамбль белковых структур, каждая из которых согласуется с наблюдаемым списком экспериментальные ограничения. Структуры в этом ансамбле будут очень похожи друг на друга в регионах. с сильными ограничениями и сильно отличается в менее ограниченных частях цепи. Предположительно, эти области с меньшим количеством ограничений являются гибкими частями молекулы и, следовательно, не дают прочного сигнал в эксперименте.

В архиве PDB вы обычно найдете два типа записей координат для структур ЯМР.Первый включает в себя полный ансамбль из определения конструкции, при этом каждая структура обозначена как отдельная модель. Второй тип входа - это минимизированная средняя структура. Эти файлы пытаются захватить средние свойства молекулы на основе различных наблюдений в ансамбле. Вы также можете найти список ограничений, которые были определены в эксперименте ЯМР. К ним относятся вещи как водородные связи и дисульфидные связи, расстояния между атомами водорода, которые близки друг к другу, и ограничения на локальную конформацию и стереохимию цепи.

Некоторые ограничения, используемые для определения структуры небольшого мономерного гемоглобина, показаны здесь с использованием программного обеспечения от BioMagResBank 1 . Белок (1vre и 1vrf) показан зеленым, а ограничения показаны желтым.


3D электронная микроскопия

Электронная микроскопия, часто называемая 3DEM, также используется для определения трехмерных структур больших макромолекулярных ансамблей. Пучок электронов и система электронных линз используются для непосредственного изображения биомолекулы.Чтобы получить трехмерную структуру из двумерных проекционных изображений, полученных с помощью просвечивающих электронных микроскопов, необходимо несколько уловок. Наиболее часто используемый сегодня метод заключается в визуализации многих тысяч различных отдельных частиц, сохраненных в тонком слое некристаллического льда (крио-ЭМ). При условии, что эти изображения показывают молекулу во множестве различных ориентаций, вычислительный подход, аналогичный тому, который используется для компьютерной аксиальной томографии или компьютерной томографии в медицине, даст трехмерную карту плотности массы. При наличии достаточного количества отдельных частиц карты 3DEM могут быть затем интерпретированы путем подгонки атомной модели макромолекулы к карте, точно так же, как макромолекулярные кристаллографы интерпретируют свои карты электронной плотности.В ограниченном числе случаев электронная дифракция от 2D или 3D кристаллов или спиральных ансамблей биомолекул может использоваться для определения трехмерных структур с помощью электронного микроскопа с использованием подхода, очень похожего на метод рентгеновской кристаллографии. Наконец, методы 3DEM приобретают все большее значение при изучении биологических ансамблей внутри криоконсервированных клеток и тканей с помощью электронной томографии. Этот метод включает запись изображений под разными углами наклона и усреднение изображений по множеству копий биологической сборки на месте.

С точки зрения молекулярных и атомных деталей, методы одночастичной 3DEM и электронной дифракции теперь дают структуры с пределами разрешения, сравнимыми с макромолекулярной кристаллографией (т. Е. Позволяют визуализировать боковые цепи аминокислот, молекулы поверхностной воды и нековалентно связанные лиганды) . Криоэлектронная томография дает структурную информацию с немного более низким разрешением (т.е. белковые домены и вторичные структурные элементы). В 2016 календарном году количество отложений структур 3DEM из PDB впервые превысило показатели ЯМР-спектроскопии.

Последние впечатляющие достижения в области возможностей 3DEM отражают конвергенцию ряда технологий, включая подготовку / консервацию образцов в стекловидном льду, улучшенную электронную оптику, фазовые пластины для увеличения контраста электронного изображения, прямые электронные детекторы, улучшенное программное обеспечение для обработки данных и более быстрое компьютеры. Эта случайная конвергенция параллельна ускорению макромолекулярной кристаллографии, которое произошло в 1990-х годах, когда замерзание кристаллов, линии пучка синхротронного излучения, пластины изображения и ПЗС-детекторы, улучшенное программное обеспечение для обработки данных и более быстрые компьютеры объединились в более ранний идеальный шторм для структурной биологии.

В работе, сосредоточенной на очень больших макромолекулярных ансамблях, где более низкое разрешение является нормой, данные 3DEM все чаще объединяются с информацией из рентгеновской кристаллографии, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, химического сшивания, резонансного переноса энергии флуоресценции и различных расчетных данных. методы, чтобы отсортировать атомные детали. Такую практику объединения нескольких экспериментальных подходов часто называют интегративными или гибридными методами (I / HM). Они оказались очень полезными для многомолекулярных структур, таких как комплексы рибосом, тРНК и белковых факторов, а также для мышечных актомиозиновых структур.Репозиторий прототипов данных PDB-Dev, работающий параллельно с PDB, теперь доступен для архивирования структур и данных I / HM.

Эта крио-ЭМ карта бета-галактозидазы была построена из более чем

изображений молекулы, замороженной во льду, которые были достаточно детализированы, чтобы предоставить атомную модель. Карта криоЭМ находится в записи EMDataBank EMD-2984, а атомные координаты находятся в записи PDB 5a1a.
Изображение любезно предоставлено Вероникой Фальконьери и Сириам Субраманиам, Национальный институт рака.

.

Какова роль Rho GTPases в регуляции сборки фокальной адгезии?

Синергетическая передача сигналов интегрин-синдекан

Скорость и степень образования и созревания очаговой адгезии регулируются такими факторами, как синергетическая передача сигналов интегрин-синдекан и чередующиеся циклы активации Rho (Rac1, Cdc42 и RhoA) GTPases.

GTPases семейства Rho Cdc42, Rac1 и Rho действуют в разных регионах клетки (обозначены стрелками) для управления миграцией.Cdc42 обычно контролирует полярность клеток и образование филоподий и возникающих фокальных спаек (показано желтыми точками). Rho влияет на сборку и созревание клеток, в дополнение к контролю образования стрессовых волокон и сократительной активности. Rac1 в первую очередь контролирует сборку актина и образование зарождающейся адгезии в ламеллиподии.

Ни синдекан, ни интегрин не способны независимо поддерживать адгезию или распространение клеток. Несмотря на кооперативность пар интегрин-синдекан в различных контекстах (обзор в [1]), недавние исследования установили синергетическую передачу сигналов с помощью интегрина β1 и синдекана-4; они играют кооперативные, но отличные роли в распространении клеток и созревании адгезий, а также в направленной миграции соответственно [2] [3].Рецепторы совместно локализуются в ранних сайтах адгезии на переднем крае со связыванием лиганда обоими рецепторами (например, фибронектин связывается через клеточный связывающий домен [RGD с интегрином и через домен HepII с синдеканом), что необходимо для передачи сигналов ниже по течению [4] [5]. Это очень важно, поскольку полярность и миграция клеток определяются по-разному регулирующими сигналами на переднем и заднем краях.

Миграция состоит из циклов выпячивания мембраны, прикрепления и сокращения цитоскелета, что вызывает движение вперед.Иммобилизация интегринового лиганда абсолютно необходима для создания напряжения для образования адгезии и связывания актина, в то время как передача сигналов синдекана в первую очередь помогает ощущать среду для выпячивания мембраны.

Динамика RhoGTPase во время сборки фокальной адгезии

Локальная передача сигналов происходит через чередующиеся циклы активации GTPases Rac1 (ламеллиподиум) и / или Cdc42 (филоподий) и RhoA, регулируемые путями протеинкиназ на переднем крае [6] (обзор в [7] [8]).

Эта схема подчеркивает сигнальные пути, которые играют важную роль в обеспечении регулируемого GTPase выпячивания в ламеллиподиях и в дифференциальной динамике адгезии в различных регионах клетки. Передача сигналов FAK важна на всех стадиях жизненного цикла адгезии, тогда как киназы, такие как PAK и ROCK, влияют на более поздние стадии, способствуя сократимости актомиозина. PAK подсвечивается зеленым во время созревания, чтобы указать, что он активирован раньше Rac, а не Rho.По материалам [17, 18].

Стабильная адгезия, индуцированная Rac1, может первоначально поддерживать напряжение, что позволяет RhoA-опосредованной сократимости и тянущим силам придавать стабильность связям, тем самым генерируя последующие сигналы, которые распространяются на остальную часть клетки или аксона [9] [10] [11 ] [12] [13]; эти сигналы служат как петли обратной связи, чтобы ограничить направление выпячивания и снизить локальную активность Rac1 [14], [15]. Следует отметить, что любой рецептор вносит вклад в регуляцию обеих GTPases, однако Rac1 в первую очередь находится под влиянием синдекана-4 [16].Координация такой сложной сигнализации осуществляется с помощью сигналов наведения.

Активация Rac1 при раннем внесении

В то время как интегрин α5β1 активирует Rac1, регулируя как локализацию по ведущему краю, так и загрузку GTP, syndecan-4 влияет только на загрузку GTP (rev. [1]).

Интегрин передача сигналов и зарождающееся образование адгезии задействуют GEFs, такие как Dock 180 и PIX для Rac и Cdc42 на переднем крае, активируя их. Он также инактивирует p190RhoGAP, в то время как активация PKC α ниже синдекана-4 секвестрирует его через мембрану для подавления активации Rho.PIP2 обозначен на мембране розовым цветом. Активация PKC также способствует дальнейшей активации Rac1 и обеспечивает поддержание активности Rac1 на переднем крае за счет распределения липидов (не показано). По материалам [18].

При связывании лиганда передача сигналов интегрина рекрутирует GEFs для Rac1 и / или Cdc42 в ламеллиподиях и филоподиях соответственно [17] [18] [19] [20]. Они инициируют базальную активность Rac1, необходимую для начального распространения клеток [21], координируемую с помощью пути передачи сигналов Src-FAK [22] (rev. [23] [24]).Кроме того, лигандированные интегрины сохраняют активный Rac1 на переднем крае, опосредуя временное перераспределение липидов, которое локализует GTP-Rac1 на мембране [25].

Во время этого перемещения, взаимодействие Rac1 с Rho-GDI нарушается, позволяя связываться с p21-активированной киназой (PAK) [26] [27]. В ламеллиподиуме PAK способствует полимеризации актина путем инактивации кофилина и способствует распространению, периодически подавляя локальную активность миозина [18] [28] [29]. Он также помогает реорганизации актина в ламеллах [29].

При взаимодействии syndecan-4 образует тройной комплекс с PKCα и PIP2 [30], [31], а его олигомеризация приводит к активации PKCα [32]. Это критический шаг для дальнейшей GTP-загрузки Rac1, ограничения активности Rac1 ведущим краем и определения окружающей среды для направленной миграции [16]. Они облегчают передачу сигналов ниже по течению для Rac1-обеспечиваемого выпячивания актина [33].

Подавление Rho на передней кромке

Очень важно подавить сигналы сокращения во время протрузии, чтобы способствовать движению вперед и обороту адгезии.Это снова достигается за счет конвергентной передачи сигналов рецептора, которая сохраняет RhoA неактивным во время активности Rac1 на переднем крае [34] [35]. При вовлечении интегрина β1 FAK фосфорилирует и инактивирует p190RhoGAP, необходимый для активации RhoA (существенная роль) [36] [37]. Затем он стыкуется с мембранной фракцией за счет связывания p120RasGAP и FAK [38] и опосредованного синдеканом-4 перераспределения в мембранные складки [39] [40] (модулирующая роль). Кроме того, фосфорилирование p190RhoGAP запускает другую волну интегрин-зависимого распределения липидов, которая поддерживает подавление RhoA до полного распространения клетки.

Активация Rho при позднем внесении

Точный механизм взаимной обратной связи, посредством которого RhoA активируется в ламеллах во время созревания / разборки адгезии, оставался неясным до недавнего времени. Однако существует несколько линий доказательств участия интегрин- и сигнальных путей синдекана.

Помимо реорганизации актина, Rac-активированная PAK также фосфорилирует регуляторную легкую цепь (RLC) миозина II, таким образом активируя связывание актина и сократительный механизм.Myosin IIA / Myosin IIB-обеспечиваемое связывание актомизоина генерирует стабильные адгезии, ингибирует Rac-GEFs в непосредственной близости, модифицируя компоненты адгезии, которые способствуют их рекрутированию и тем самым устанавливают клеточный тыл [41]. Силозависимым образом, Rho-специфические GEFs, как было показано, активируются и рекрутируются в фокальные спайки посредством FAK и Fyn [42] [43] (рассмотрено в [37]). Таким образом, интегрин-сигнальный путь активирует RhoA. Сходным образом был показан зависимый от синдекана-4 путь для образования и поддержания стрессовых волокон и созревания фокальной адгезии.После кластеризации синдекана-4 GTP-загрузка RhoA увеличивается PKCα-зависимым образом [44].

Активация RhoA дополнительно усиливает сократительную способность и создает клеточное напряжение за счет Rho киназы, ROCK, которая поддерживает фосфорилирование RLC миозина [45] [46] (обзор в [47]). Зависимое от напряжения снижение активности Rac было продемонстрировано [48] [16129884 [/ cite] и, как полагают, происходит за счет стимуляции Rac-GAP, ARHGAP22 с помощью киназы Rho, ROCK [49]. Сходным образом CdGAP, как было показано, ингибирует ламеллиподиальное выпячивание и, как предполагается, делает это посредством своего действия как на Rac, так и на Cdc42 [17] [50].

.

Смотрите также


Оцените статьюПлохая статьяСредненькая статьяНормальная статьяНеплохая статьяОтличная статья (проголосовало 13 средний балл: 5,00 из 5)
Загрузка...